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Cette méthode sert à dénombrer les coliformes totaux par filtration sur membrane et s’applique aux eaux usées, aux eaux souterraines, à l’eau de surface et à l’eau de consommation. Les échantillons de sols, de boues, de déchets solides et de sédiments peuvent être analysés par cette méthode si la concentration suspectée en coliformes totaux est supérieure à 10 UFC/g d’échantillon humide (unités formant des colonies).

Les coliformes totaux sont utilisés comme indicateur de pollution d’origine organique.

PRINCIPE ET THÉORIE

La méthode de filtration sur membrane consiste à recueillir, identifier et dénombrer, à la surface d’une membrane filtrante stérile, les bactéries recherchées dans un échantillon. Les eaux usées doivent faire l’objet de dilutions et les solides sont mis en suspension et dilués dans un tampon phosphate. Pour les coliformes totaux, un volume déterminé de l’échantillon est filtré à travers une membrane d’une porosité de 0,45 μm et ensuite incubé pendant 24 heures ± 2 heures à 35 °C ± 0,5 °C sur le milieu m-Endo. Dans ces conditions, le résultat des réactions biochimiques

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entre un sous-produit de la fermentation du lactose (l’acétaldéhyde), la fuschine basique et le sulfite de sodium présent dans le milieu de culture permet la croissance sélective, la numération et l’identification présomptive des coliformes totaux qui apparaissent en colonies caractéristiques à reflets vert métallique. La présence de coliformes totaux est confirmée ensuite par une réaction négative à l’épreuve de la cytochrome-oxydase et une réaction positive au test de l’ONPG.

Le lauryl sulfate de sodium présent dans le milieu de culture m-Endo inhibe la croissance des microorganismes sporulants producteurs de gaz, alors que le désoxycholate de sodium et l’alcool inhibent les microorganismes sporulants et les bactéries à Gram positif.