TP4 : les agents mutagènes

Le coin du  professeur /Objectifs :

Savoir :

Connaître l’action des agents mutagènes sur la molécule d’ADN.

Transmission de la mutation et réparation des erreurs de transcription.

Savoir –faire :

Concevoir un protocole expérimental.

Mettre en œuvre un protocole expérimental.

Suivre les étapes d’un ensemencement.

Mettre  en évidence l’influence d’agents mutagènes sur des populations humaines (UV)

Analyser  l’influence de l’irradiation d’une culture de levures par des UV (suivi du taux de mortalité). Utiliser des logiciels pour caractériser des mutations.

Introduction :

Chez toutes les espèces, il existe une variabilité génétique, ainsi chez les levures, il existe des levures sauvages blanches et des levures de la souche Ade 2 formant des colonies rouges.

La couleur de ces levures Ade2 est due à une mutation qui permet la fabrication d’un pigment

de couleur rouge que ne fabriquent pas les levures sauvages.

I- Matériel :

• Boites de pétri  avec gélosé coulée+  pipettes pasteur + râteau+ bec benzène + eau distillée+ bécher + stylo feutre
• Suspension de levures ade-2
• Lampe UV+ étuve
• Fiche méthode du logiciel Mesurim et Anagène + image des résultats de l’expérience + Fichier ade2.edi.

II- Méthodes :

Partie 1 : Manipulation laboratoire

Mise en garde : Faites attention cette manipulation nécessite de la rigueur et de la concentration.

Protocole :

1. Lavez-vous les mains avec un bactéricide.
2. Allumez le bec benzène tout en faisant attention à ne pas être trop proche.
3. Ouvrez les boites de pétri dans le périmètre stérile.
4. Écrivez sur la boite le numéro correspondant à votre expérience ( pas sur le couvercle).
5. A l’aide de la pipette pasteur, prenez une quantité suffisante de suspension de levures.
6. Étalez sur toute la gélose à l’aide du râteau.
7. Fermez votre boite.
8. Mettre sous la lampe UV

• Groupe 1 : 15 sec
• Groupe 2 : 60 sec
• Groupe 3 : 90 sec
• Groupe 4 : 0 sec

1. Mettre à l’étuve

Partie 2 : Manipulation sur logiciels :

-Mesurim :

* Utilisez judicieusement les outils de ce logiciel afin de compter le nombre de colonies blanches et rouges aux différents temps d’exposition aux rayons UV.

* Utilisez un fichier Excel afin d’établir un tableau avec les mesures prises et produire une courbe pour chaque type de couleur de levures.

-Anagène :

* Ouvrez le fichier du gène ade2.edi.

* L’allèle 1 correspond aux colonies blanches et l’allèle 2 aux colonies rouges.

* Effectuez une comparaison avec alignement.