Travaux pratiques interdisciplinaires biologie

Projet expérimental transdisciplinaires : Caractérisation des réponses de défenses des plantes

Introduction :

1. Partie 1 : Etude sur l’expression d’un facteur de transcription au cours des réponses de défenses de la plante après son élicitation.

1. Elicitation des plantules de riz et extraction des ARN

1. Traitement du riz par un éliciteur

2. Broyage des échantillons

3. Extractions des ARN

4. Dosage des ARN

1. RT-PCR sur les ARN totaux de riz et analyse par électrophorèse sur gel d’agarose.

1. Transcription inverse pour l’obtention des ADNc

2. PCR

3. Analyse des produits de RT-PCR par électrophorèse sur gel d’agarose

1. Partie 2 : Détermination de l’activité de l'oryza cystatine I (OCI) de riz après sa purification.

1. Purification de l’OCI recombinante à partir de culture bactérienne et dosage

1. Préparation de la fraction soluble d’E. coli contenant l’OCI recombinante

2. Purification de l’OCI recombinante par chromatographie d’exclusion-diffusion

3. Dessalage de l’OCI recombinante par chromatographie d’exclusion-diffusion

4. Dosage de l’OCI par la méthode de Bradford

1. Test d’activité inhibitrice de l'Oryza cystatine I (OCI)

2. Analyse des protéines purifiées et tu test d’inhibition

1. Préparation des gels d’acrylamide et électrophorèses

2. Electro-transfert ou western blot et immunodétection

3. Détection des protéines par coloration au bleu de Coomassie

1. Partie 3 : Activités de deux phytoalexines et de l’OCI sur la croissance de micro-organismes phytopathogènes et sur la prolifération de cellules humaines.

1. Test de l’activité antifongique et antibiotique de l’OCI, de la vinblastine et de la scopolétine

1. Ensemencement des boîtes avec la bactérie Erwinia chrysanthemi

2. Préparation des gammes de dilution des composés

3. Test antimicrobien

1. Test de l’activité anti-proliférative de l’OCI, de la vinblastine et de la scopolétine sur des cellules humaines en culture

1. Comptage et ensemencement des cellules MDA-MD-231

2. Traitement des cellules avec l’OCI, la vinblastine et la scopolétine

3. Test de viabilité/toxicité des molécules

Conclusion :