Ingénieur en chimie, l'industrie pharmaceutique tunisienne.

Introduction générale

L’industrie pharmaceutique tunisienne, a connu un développement avec un rythme accéléré ces dernières années, puisque jusqu’en 1989 une seule unité étatique, à savoir la Pharmacie Centrale de Tunisie, assurait la fabrication de quelques médicaments à usage humain.

Le secteur privé s’est développé rapidement au cours de ces  dernières années.  Les promoteurs sont tous des professionnels du médicament. Ils ont crée leurs entreprises et les dirigent.

La mondialisation amène les sociétés pharmaceutiques tunisiennes à s’occuper davantage de l’assurance qualité afin de pouvoir proposer aussi bien à l’intérieur qu’à l’extérieur du pays des produits de haute qualité préparés  avec du matériel qualifié et systématiquement contrôlé.

Sur le plan général, la qualité peut être définie comme la capacité d’un produit à satisfaire les besoins de l’utilisateur.

Dans ce contexte, la validation des méthodes analytiques est un concept fondamental au sein des laboratoires de contrôle qualité de l'industrie pharmaceutique. Cette étape est essentielle afin d'une part, de se conformer aux exigences réglementaires, et, d'autre part, dans une approche qualité, de développer la maîtrise des méthodes d'analyse, au quotidien.

Ce  travail consiste à donner un protocole de validation analytique de dosage (HPLC-UV visible) appliquée à la spécialité pharmaceutique (Frubiose calcique faible).

Au cours de ce travail, on va valider et optimiser la procédure analytique du dosage par HPLC de la vitamine D2  afin d’avoir confiance dans la qualité des produits fabriqués.

Le travail comporte quatre chapitres:

• Un premier est consacré à une étude bibliographique dans laquelle on met  l'accent, sur des notions portant sur les médicaments et la substance active à étudier
• Un deuxième qui porte sur les méthodes d'analyse  adoptées  au cours de mon PFE (méthodes  spectroscopiques et chromatographiques)
• Un troisième qui porte sur des notions de base sur les différents critères de validation selon les normes européennes.
• Ainsi qu’un dernier, dans lequel  on  présente le travail adopté pour optimiser  la méthode du dosage de la vitamine D2 par HPLC, l’extraction de cette dernière de la spécialité pharmaceutique (Frubiose calcique faible) et  la démarche statistique adoptée  de la validation analytique avec les différents tests exécutés.

I.1. Présentation du médicament (Frubiose calcique faible) 

I.1.1. Introduction 

 La médecine  a beaucoup profité de la recherche pharmaceutique et de la découverte de nouveaux médicaments.

On entend par médicament toute substance ou composition présentée comme ayant des propriétés curatives ou préventives à l'égard des maladies humaines ou animales, ainsi que tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal en vue d'établir un diagnostic médical ou de restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions organiques [1]. 

I.1.2. De quoi est constitué un médicament 

 Les médicaments sont constitués d’une ou plusieurs substances présentant une action  thérapeutique : les principes actifs, et d’autres substances, appelées excipients, destinées à  faciliter la mise en forme du médicament, lui conférer un goût particulier, diminuer certains  effets indésirables…

I.1.3. Etapes d’élaboration d’un médicament

• Phase de conception et de recherche: (Recherche des principes actifs).
• Mise en application de la découverte: (tests précliniques pharmaco toxicologiques)
• Essai du produit : (tests cliniques).
• Demande d'Autorisation de Mise sur Marché (A.M.M).
• Production et commercialisation [2].

I.1.4. Présentation de la spécialité pharmaceutique: (Frubiose calcique faible) 

I.1.4.1. Composition 

• Substance active: Ergocalciférol: vitamine D2

• Excipients 

I.1.4.2.Forme 

 Solution buvable [3].

I.2. Présentation de la vitamine D2

I.2.1. Historique 

 Au cours des années 1920,  on  a  découvert  que l’huile de foie de morue peut  traiter le rachitisme.  A la fin des années 20, le docteur Harry Steenbok et le docteur Hess ont montré que le traitement du rachitisme peut être effectué par exposition au soleil. En 1932, le calciférol  a été isolé et qui a été  nommé ensuite : Vitamine D.

        C’est en 1952 que la synthèse de cette vitamine a été réalisée par Woodward qui en 1965 obtiendra le prix Nobel [4].

I.2.2. Sources

        La vitamine D2 possède une seule origine: origine exogène par l’alimentation.

         On la trouve dans les aliments d’origine végétale (céréales, levures, champignons) en petite quantité [5].

I.2.3. Structure chimique de la vitamine D2 

        Il existe plusieurs formes de vitamine D, parmi lesquelles on s'intéresse à la vitamine D2, puisqu’elle est le sujet de ce projet:

[pic 1]

Figure I-1 : Formule structurelle de la vitamine D2 (ergocalciférol)

La vitamine D2 est une vitamine liposoluble.  Elle fait partie des sécostéroïdes [6].

I.2.3. Propriétés physico-chimiques 

        L’ergocalciférol ou vitamine D2, de poids moléculaire 396,6 se présente en cristaux, incolore, inodore. Pratiquement insoluble dans l’eau, l’ergocalciférol est très soluble dans l’alcool concentré, l’éther, le chloroforme, l’acétone .Son pouvoir rotatoire est dextrogyre. Le point de fusion est compris entre  118 – 121 °C. On note le maximum d’absorption dans l’ultra violet  à 265   nm [7-8].

I.2.3. Rôle de la vitamine D2 

• Stimule l’absorption intestinale du calcium et du phosphore (contribue dans la formation des os et des dents).
• Contribue dans le mécanisme de l’appareil locomoteur (en particulier les muscles).
• Agit d’une manière favorable lors des maladies cardio-vasculaires, neurologiques, cancéreuses….

I.2.4. Effet indésirable de la vitamine D2

        Dans le cas de surdosage (hypercalcémie) :

• Troubles du rythme cardiaque
• Faiblesse et  fatigue
• Troubles de la conscience
• Défaillance rénale (voire la mort) [9]

II.1. Introduction 

La chimie analytique est la branche de la chimie qui a comme but l’identification, la caractérisation et la quantification des substances chimiques ainsi que le développement des méthodes nécessaires à cette analyse. Elle s’intéresse à la compréhension des  phénomènes mis en jeu dans les processus et les techniques d’analyse afin de pouvoir  sans cesse les améliorer.

La chimie analytique  joue un rôle important dans le contrôle de la   qualité des produits qui est indispensable pour les industries chimiques, pharmaceutiques et alimentaires.

Ce rôle est garanti par un ensemble de techniques d’analyse. Ces techniques sont des méthodes d’analyse spectrales ou bien séparatives.

II.2. Spectroscopie UV-Vis

II.2.1. Principe de la méthode 

        L’absorption de la lumière UV (200-400nm) ou visible (400-800nm) par des molécules conduit à l’excitation électronique des électrons π (des doubles et triples liaisons) ou des électrons n (paire d’électrons non liants ne participant à aucune liaison).

        L’énergie absorbée par l’intermédiaire de ces molécules dans ce domaine de longueur d’onde conduit au passage des électrons d’un état bas (E1) (fondamental) à un niveau d’énergie plus élevé (E2)(excité). L’énergie absorbée correspond à  la différence entre les énergies relatives aux orbitales concentrées :

                                                [pic 2]

Equation 1

Avec :

h : constante de Planck = 6,62606957.10-34 J⋅s

ν : fréquence de l’onde  en (s-1)

c : célérité de la lumière= 3.108 ms-1

λ : longueur d’onde en  (nm)

La quantité d’énergie mise en jeu au cours de l’excitation est inversement proportionnelle à la longueur d’onde nécessaire pour provoquer la transition. Ainsi pour des λ faibles on obtient des lumières plus énergétiques que celle obtenue par des λ élevées.

On définit alors l’absorbante  A comme suit: