Compte rendu correction

But:

voir début sur feuille rose

Dans le but de determiner l’activité spécifique.

Il faut donc doser activité enzymatique dans fraction d’interet puis doser la masse de protéine de maniere a determiner l’activité spécifique.

Principe :

Dans le principe c’est la méthode de fonctionnement quel regle gouverne la methode de séparation.

Exclusion : c’est l’inverse se sont les grosses protéines qui sortent en premier.

Une petite bille va etre diffuser à l’intérieur des billes. Donc les grosses passe direct sans passer dans les billes (pas une question de poid mais de taille et aussi forme).

Quand on travaille avec des protéines on travaille toujours avec des tampon jamais avec eau pour pouvoir controler le pH.

Limite d’exclusion: Toute les protéines qui vont dépasser cette passe sortiront en même temps et ne vont jamais pouvoir rentrer dans les billes.

Problème de la suite avec « le principe jusqu’à la fin »: c’est du protocole on y voit un mode expérimentale.

Sur l’annexe 1 il aurait fallu mettre volume d’élution ou numéro des tubes.

Très important:

Attention problème on ne lit jamais sur la courbe, on lit sur une droite.

Il faut toujours sur une calibration obtenir une droite car il y a proportionalité entre les grandeurs et il faut alors calculer les valeurs pour l’échantillon d’intérêt.

Avec une droite on peut calculer son équation, pour une courbe on ne peut pas calculer son équation.

En TP on obtient une calibration on calcul lequation de la droite et on trouve la valeur expérimentale mais jamais reporter sur un graphique car on va trouver une valeur approcher.

Donc sur TP affinité quand on va faire la gamme ethalon il faut calculer l’équation de la droite.

Dernier phrase gel filtration : 215 nm et pas 230.

A 215 nm c’est la longueur d’absorbance des liaisons peptidiques desfois on utilise 215 par rapport à 280 car sa marche pour tout type de protéine notamment pour celle qui n’ont pas d’acides aminés aromatiques.

Dosage des protéines par le reactif de Bradford:

Coomassie : fautes d’orthographe

L’absorbance ne va jamais être supérieur à 1 : la limite d’absorbance sa depend des machines et la limite en réalité il faut que ce soit une droite peut importante sa valeur il faut seulement une droite de calibration.

Ex sur le TP de trypsine la linéarité va jusqu’à 3.

Mesure de lactivité enzymatique alpha amylase:

L’unité enzymatique : ce sont des micromoles par minutes : c’est 1micromole de RBB par minutes.

Principe sur 4 point : 1,5

Résultats:

Trop court premiere phrase soit on ne met rien soit on met tout le but.

ATTENTION PAS METTRE DE PROTOCOLE DANS LE COMPTE RENDU.

Commence par l’annexe 2 il faut commencer par l’annexe 1.

L’annexe 1: il manque :

-la légende, en abscisse il faut mettre le numéro des fractions, l’ordonné c’est l’absorbance lue à 215nm.

Titre: profil de séparation du mélange protéique

La numérotation des pics

Il faut repéré l’alpha amylase sur le graphique: c’est la fraction du pic à 70.

Il manque les flèches.

Annexe 2:

Il manque légende des axes : en abscisse c’est aussi le numéro des fractions.

L’axe des ordonnées c’est absorbance lues à 215 nm.

Il manque l’échelle. 1cm =1 DO et 1cm =1fraction

Il faut identifier les pics sur chaque pic il faut mettre le nom de la protéine.

p6.

Ce qui sort en premier ce sont les grosses protéines donc 1ere protéine qui sort=bleu dextran, le pic 7 c’est l’anhydrase carbonique.