TP n°2 : Identification des groupages sanguins

2éme LMD

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I-Rappels

Lors d’une réaction immunitaire humorale, les cellules immunitaires produisent des anticorps (Ac) qui réagissent spécifiquement avec l’antigène (Ag), en formant un complexe antigène-anticorps dénommé complexe immun.

I-1-Précipitation et agglutination

• Précipitation : formation de complexes immuns avec des antigènes moléculaires. Dans des rapports de concentrations adéquats –à l’équivalence- l’Ag et l’Ac se complexent pour former de larges réseaux qui s’agrègent et se précipitent.
• Agglutination : formation de complexes immuns avec des antigènes particulaires. Ces antigènes sont naturellement à la surface des cellules, des bactéries, etc., mais ils peuvent aussi être fixés à des particules de grande taille (billes de latex).

Si les particules porteuses des antigènes sont des érythrocytes; il s’agit d’une hémagglutination, et si c’est des globules blancs ; il s’agit d’une leukoagglutination.

II-Identification des groupages sanguins

II-1-Principe

La détermination du groupe érythrocytaire d'un individu s'effectue en mélangeant le sang avec des anti-A, anti-B, anti-A+B et anti Rh (D). Cette opération est habituellement pratiquée sur des plaques de microtitrage ou sur des lames (test de Beth Vincent)

II-2-Matériels et équipements

- Sangs de différents individus récupérés dans des tubes contenant un anticoagulant : EDTA.

- Lames

- Centrifugeuses

- Micropipettes

II-3-Mode opératoire

• Déposer sur deux lames quatre gouttes de sangs à tester à deux cm les unes des autres.
• Déposer deux gouttes de sérum-test anti A en face de la première, deux gouttes d'anti-B en face de la seconde, deux gouttes d'anti A+B en face de la troisième et deux gouttes d'anti-D.

• A l’aide d’un embout, mélanger le sérum avec les cellules ou le sang.
• Après 2 à 3 minutes; observer les lames en les inclinant.
• L'observation d'une agglutination révèle la présence de l'agglutinogène correspondant au sérum-test utilisé. L'absence d'agglutination traduit l'absence de l'agglutinogène correspondant.

• Réaction positive : les hématies agglutinées apparaissent comme des conglomérats rouges espacés de liquide clair et limpide de la couleur du réactif initial ou du sérum du patient. 
• Réaction négative : le mélange globules rouges/sérum donne une teinte homogène orangée.

II-4- Test de compatibilité

---Le test de compatibilité « Cross-matching » implique la suspension d'érythrocytes d'un sachet provenant d'un donneur avec le sérum du receveur, une incubation (à la température ambiante et à 37° C) pour permettre aux réactions de se produire et un examen de l'agglutination pour s'assurer qu'aucune réaction ne se produit.

Principe

Les globules rouges du donneur ne doivent pas s’agglutiner avec des anticorps du receveur.

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• Objectifs

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 - Observer au microscope photonique les hématies agglutinées et non agglutinées et comparer entre les deux.

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• Lecture de la plaque

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