Compte rendu de physiologie animale

Compte rendu physiologie animale

I/ Introduction :

L’expérimentation animale est un domaine très encadré. Elle est réglementée grâce à la règle des 3R qui ont pour but de Réduire, Remplacer et Raffiner l’utilisation d’animaux dans la recherche expérimentale, dans beaucoup d’autres domaines dont ici, l’enseignement supérieur et technique.

Ce TP a pour but de déterminer le volume sanguin total chez le rat. Pour ce faire un traceur, le Bleu Evans (BE) a été utilisé. Il s’agit d’un traceur qui permet de déterminer le volume plasmatique et indirectement le volume sanguin total.

Il est intéressant de chercher à déterminer ces valeurs

Le TP s’est déroulé de la façon suivante : procédures de canulisation et de cathéterisation sur le rat ; détermination des concentrations de BE à injecter, la centrifugation du sang prélevé et la détermination du volume sanguin grâce à la concentration de bleu Evans dans le plasma.

II/ Matériel et méthodes :

A)Procédures expérimentales sur le rat

Le rat est anesthésié à l’uréthane à 5 %. Il est ensuite pesé : 305g. Une première incision est faite dans la zone du cou. L’épiderme, ainsi que les tissus conjonctifs sont dilacérés. Les glandes salivaires sont dégagées afin d’accéder au champ opératoire. La veine jugulaire, une fois dégagée est ligaturée au niveau céphalique (fil serré) et du triangle cardiaque (fil lâche). Une incision est faite au niveau du triangle cardiaque afin d’insérer la canule. Le mandrin est mis en place afin d’éviter la coagulation du sang.

La deuxième procédure concerne l’artère carotidienne. Une fois dégagée et libéré des fibres nerveuses qui l’entourent, elle est ligaturée au niveau céphalique (serré) et deux fils (lâche) en dessous. Un clamp est posé côté cardiaque avant l’incision. Après incision, il y a insertion du cathéter préparé au préalable (biseauté, rincé au sérum physiologique (sp) hépariné, puis bouché). Le prélèvement se fait de la façon suivante : -le cathéter est débouché, le clamp est retiré et le sang coule du cathéter dans le tube. Le tube est préparé en amont avec une goutte d’héparine au fond afin d’empêcher la coagulation.

B)Détermination des valeurs numériques

a)Détermination concentration BE à injecter au rat

Le rat est pesé et fait 305g. Il faut injecter 0,05g de BE pour 100G de rat. La solution est proposée à hauteur de 0,025 % cest à dire 0,025g pour 100ml. Les calculs sont les suivants, grâce au produit en croix : (305x0,05)/100=0,1525 ce qui donne un rapport de 0,1525mg pour 305g.

On convertit ensuite en ml : (0,1525x100)/25= 0,61 ml. Il faut donc injecter 0,61ml de BE au rat.

b)Détermination lambda max –> courbe étalonnage

A partir d’une solution mère, quatre dilutions sont faites (cf schéma 1). En passant dans le spectrophotomètre une de ces dilutions, il a été possible d’identifier le lambda maximum, c’est à dire la longueur d’onde pour laquelle l’absorbance était maximum. Ensuite, en fixant le paramètre de la longueur d’onde maximum, il a été possible de créer une courbe d’étalonnage, c’est à dire le degré d’opacité en fonction de la concentration.

C)Manipulations

a) Injection BE par canule

Une fois les procédures effectuées comme expliquées précédemment, il faut injecter le BE dans la canule. Il faut injecter doucement à hauteur de 3ml/min afin de ne pas augmenter la pression artérielle. Après le BE, il faut immédiatement rincer avec 0,5ml de sp pour enlever le BE qu’il resterait dans la canule.

b) Prélèvement par cathéter

Une fois le BE injecté, il est nécessaire d’attendre 3min (si le rat présente des signes montrant qu’il risque de mourir) à 5min (si le rat ne présente aucun signes de décès) avant de prélever par le cathéter carotidien dans un tube. Il s’agit du temps de diffusion optimal du BE dans le sang.

c) Centrifugation sang prélevé

Ensuite, une fois le sang prélevé dans un tube, il faut le mettre à centrifuger. Lorsque le tube sort de la centrifugeuse, trois phases se distinguent : (cf schéma 2) ci-contre.