Compte rendu TP : Étude du sang In Vitro

Compte rendu TP : Étude du sang In Vitro

CRISTINI Olivier & PELAPRAT Yohan

Introduction

        Le sang est le liquide circulant dans le corps le plus important. Il représente 25% des flux liquides dans l’organismes. Il se divise en deux fractions : une phase liquide appelée plasma qui représente 60% du volume sanguin et des cellules et autres éléments en suspension dans ce liquide. Le plasma est un liquide très riche à la composition très variée contenant de nombreuses molécules essentielles au métabolisme. Les globules rouges présents dans le plasma sont quant à eux chargés de transporter l’oxygène dans l’organisme. Ils sont composés de nombreuses protéines qui leur permettent d’assurer leur rôle de transporteur. Nous allons ici mettre en évidence les différences de composition du plasma et des globules rouges en observant les concentrations ioniques (K+,Na+) et protéiques dans ces deux composés.

Matériels et Méthodes

        Afin de d’étudier la composition des liquides de l’organismes, nous allons déterminer les concentrations ioniques et protéiques de ces derniers.

        Nous commençons par traiter le sang afin de séparer le plasma des globules rouges. Pour cela nous centrifugeons notre solution sanguine et nous prélevons le surnageant (plasma).

        Nous devons par la suite laver nos globules rouges. Nous procédons donc à deux lavages au MgCl2. Après chaque lavage, nous centrifugeons la solution et nous éliminons le surnageant afin de ne préserver que les globules rouges. Nous transférons les globules rouges dans de l’eau distillée puis nous centrifugeons afin de de faire déposer les membranes et obtenir un surnageant de globules hémolysés.

        Nous réalisons ensuite les dosages de notre de plasma et de notre solution de globules rouges lysés. Nous commençons par le dosage des protéines effectué selon le principe de Bradford.

Nous préparons différents standards de solution protéique afin d’établir une courbe étalon. Une fois les tubes standards et les échantillons de plasma et de globules rouges préparés, nous ajoutons le réactif de Bradford dans chaque tube. La DO de chaque tube est mesurée par un spectrophotomètre et nous réalisons par la suite la courbe étalon des standards afin de connaître la concentration protéique de nos échantillons.

        Il nous faut maintenant réaliser le dosage des concentrations ioniques de nos échantillons. Pour cela, nous préparons une gamme étalon pour le Na+ et une autre pour le K+. Les globules rouges étant fortement protéiques, nous ajoutons de l’acide perchlorique à notre solution de globules afin de la déprotéiniser. Les échantillons sont ensuite plus ou moins dilués. Nous mesurons ensuite la concentration de notre gamme étalon par spectrophotométrie de flamme à l’aide d’un galvanomètre. Grâce à la courbe étalon obtenu , nous observons les différentes concentrations ioniques de nos échantillons.