Compte rendu de TP Biochimie sur les Caséines.

I. Résumé

Nous avons fait 3 expériences afin de savoir comment nous pouvons séparer les caséines des autres éléments du lait, mais aussi comment déterminer la concentration de ces protéines dans une solution et enfin nous avons abordé la question de la séparation d’acides aminés provenant d’hydrolysat de caséines.

II. Introduction

Lors d’une manipulation, s’étalant sur 2 séances de 4 heures, nous nous sommes penchés sur les protéines et les acides aminés du lait, et tout particulièrement les caséines qui composent 80% de toutes les protéines du lait. Ces manipulation nous ont permis de nous familiariser un peu plus avec le matériel de laboratoire mais aussi sur certaines techniques scientifique comme faire une précipitation isoélectrique, sur le dosage colorimétrique et l'application de la loi de Beer-Lambert et enfin une chromatographie de partage sur couche mince afin de connaître la composition en acides aminés de peptides petits provenant d'hydrolyse.

III. Résultats

Nous avons pesé 0.58 grammes de caséine pour commencer, et nous cherchions à déterminer la concentration massique expérimentale de caséines dans le lait de volume 20mL. Nous avions trouvé une concentration massique de 29g/L. Cette valeur est supérieure à la concentration massique théorique des caséines dans le lait, de ce fait le rendement de la préparation atteint 113% ce qui laisse supposer que la caséine n’était pas pure ou alors que l’on a récupéré d’autres protéines lors de la séparation de la caséine.

Ensuite, nous avons déterminé la concentration des caséines dans la solution à partir de la quantité de tyrosine constitutive. Pour cela à l’aide des concentrations en tyrosine connues nous avons mesuré l’absorbance à 700 nm, et tracé la courbe d’étalonnage sur papier millimétré (cf annexe). De plus nous avons mesuré l’absorbance de notre solution d’hydrolysat de caséine dilué, qui nous a permis de déterminer la concentration massique en tyrosine libre de l’hydrolysat (88mg/L) grâce à la courbe d’étalonnage. Or l’hydrolysat contient environ 400% de tyrosine libre, on en déduit que la concentration massique totale de tyrosine est de 88*100/40 = 220 mg/L. Enfin, connaissant la concentration molaire de la tyrosine de 181 g/mol, on en déduit que la concentration molaire de la tyrosine est de 200.10^-3 / 181 = 1.2.10^-3 g/mol.

On sait également que chaque molécule de caséines a dans sa séquence en acides aminés 3 tyrosines, il vient donc que la concentration molaire en caséine équivaut à la concentration molaire de tyrosine divisée par 3, soit 4.0 10^-4 g/mol.

Par conséquent la concentration massique en caséines, sachant que leur masse molaire est de 25 0000 g/mol est de 10 g/L (4.0 10^-4 * 25 000)

Enfin nous sommes nous sommes arrivés à la chromatographie.

Pistes Acides aminés Distance de migration (cm) Rapport Frontal

1 Leucine 3.6 0.6

2 Sérine 0.5 0.08

3 Arginine 0.5 0.08

4 Tryptophane 1.8 0.3

5 Asparagine 0.3 0.05

6 Glutamine 0.8 0.13

7 Méthionine 2.3 0.38

Tableau donnant le rapport frontal d’acides aminés de référence.

Ainsi, sur notre chromatographie nous avons calculé le rapport frontal des taches ayant migrées sur notre papier CCM. Ces taches correspondent aux acides aminés composant notre tripeptide . Nous avons ensuite comparé ces rapports frontaux à ceux connus à partir des acides aminés de références pour déterminer la composition en acides aminés des différents tripeptides.

A l’aide de la chromatographie, on peut également ajouter que plus le rapport frontal est grand, au plus il migre haut et au plus l’acide aminée est apolaire c’est-à-dire constitué d’une longue chaine carbonée.

Inversement, plus l’acide aminé est polaire, au moins il va migrer et au plus le rapport frontal sera petit.

La chromatographie nous a permis d’identifier la composition en acides aminés de peptides petits provenant d'hydrolyse.

IV. Conclusion

Lors de cette manipulation autour des caséines, nous avons pu nous familiariser avec le matériel de laboratoire et approfondir certaines techniques vues au lycée.

Nous avons pu réaliser chacune des expériences demandés et avons pu à chaque fois en tirer des résultats convenables puisque nous avons